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木聚糖酶活性测定方法分享
  • 发布日期:2024-07-03      浏览次数:126
    • 木聚糖是一种存在于植物细胞壁中的多糖类物质,是植物半纤维素的主要成分。
      木聚糖酶分布广泛,可以从动物、植物及微生物体内获得。

      检测原理:
      木聚糖酶可以将底物木聚糖降解为寡糖和单糖,具有还原性的寡糖和单糖在沸水浴的条件下,能够和DNS试剂发生显色反应。
      通过反应溶液的颜色的变化,来确定还原糖的含量。
      因为还原糖的生成量和反应液的木聚糖活力是成正比的,通过分光光度法可以测定,计算出样品中的木聚糖酶活力。

      检测所用的试剂:
      乙酸溶液、乙酸钠溶液、氢氧化钠溶液、乙酸-乙酸钠缓冲溶液、木糖溶液、木聚糖溶液、DNS试剂。
      所需要的仪器设备:
      碾钵、分样筛、分析天平、pH计、磁力搅拌器、电磁振荡器、离心机、恒温水浴锅、分光光度计等。

      标准曲线:
      吸取乙酸-乙酸钠缓冲溶液4ml,加入DNS试剂5ml,沸水浴加热5min,用自来水冷却至室温,用水定容至25ml,制成标准空白样。
      分别吸取木糖溶液1ml、2ml、3ml、4ml、5ml、6ml、7ml,加入缓冲溶液定容至100ml,配制成0.1-0.7mg/ml的木糖标准溶液。
      按照上述的标准溶液配制,分别做2次平行。吸取木糖标准溶液2ml,分别加入2ml水和5mlDNS试剂。
      电磁振荡3s,沸水加热5min,用自来水冷却至室温,用水定容至25ml。
      以标准空白样作为对照,在540nm处测吸光度OD值。
      以木糖浓度为Y轴,吸光度OD值为X轴,绘制标准曲线。

      检测过程:
      吸取10ml木聚糖溶液,37℃平衡10min。
      吸取10ml经过稀释的木聚糖酶溶液,37℃平衡10min。吸取2ml平衡过的木聚糖酶液,加入5mlDNS试剂,电磁振荡3s。
      加入2ml木聚糖溶液,37℃保温30min。沸水浴加热5min,用自来水冷却至室温,加水定容至25ml,电磁振荡3s。
      以标准空白样为空白对照,在540nm处测定吸光度。以同样的方法,加入2ml的木聚糖酶,电磁振荡3s,37℃精确保温30min,加入5mlDNS试剂,电磁震荡3s,以终止酶解反应。
      沸水浴加热5min,用自来水冷却至室温,加水定容至25ml,振荡3s,以标准空白样为空白对照,在540nm处测定吸光度。


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