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CCK8细胞实验
  • 发布日期:2023-07-04      浏览次数:497
    • 实验一:细胞增殖分析

      1)制备细胞悬液,计数。
      2)在96孔板中接种细胞悬液,每孔约100μl,同样的样本可做3个重复。
      3)将培养板放入培养箱中预培养一段时间(37℃, 5%CO2),细胞贴壁需要大约2-4h,如果是悬浮细胞,该步骤可以省去。
      4)每孔各加入10μl CCK-8溶液,由于加入的CCK-8量比较少,可能会因试剂沾在孔壁上而带来误差,建议在加完试剂后轻轻晃动培养板以帮助混匀,或者直接配置含10%CCK-8的培养基,以换液的形式加入。另外注意,加样的过程中尽量不要产生气泡。
      5)将培养板放入培养箱中孵育1-4h。因为细胞种类不同,形成的formazan的量也不一样,所以如果显色不够的话,可以延长培养时间,特别是血液细胞形成的formazan很少,需要较长的显色时间(5-6h)。
      6)酶标仪测定450nm处的吸光值(OD)。
      7)若暂时不测定OD值,可以在各孔中加入10μl 0.1 M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液,室温下避光保存,这样可以保证OD值在24h内不发生变化。


      实验二:细胞毒性分析

      1)制备细胞悬液,计数。
      2)在96孔板中接种细胞悬液,每孔约100μl,同样的样本可做3个重复。
      3)将培养板放入培养箱中预培养一段时间(37℃, 5%CO2),细胞贴壁需要大约2-4h,如果是悬浮细胞,该步骤可以省去。
      4)向培养板各孔中加入不同浓度的毒性物质(药物、化学试剂等待检测物质)。
      5)将培养板放入培养箱中孵育一段时间,例如6、12、24、48h,具体时间要看待测物质的性质和细胞的敏感性。
      如果待检测物质有氧化性或还原性,可在加入CCK-8之前更换新鲜培养基,以去掉待测物质的影响。如果影响比较小或者没有影响,可以不更换培养基,直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。
      6)向每孔中加入10μl CCK-8溶液,由于加入的CCK-8量比较少,可能会因试剂沾在孔壁上而带来误差,建议在加完试剂后轻轻晃动培养板以帮助混匀,或者直接配置含10%CCK-8的培养基,以换液的形式加入。另外注意,加样的过程中尽量不要产生气泡,以免影响OD值读数。
      7)将培养板放入培养箱中孵育1-4h。因为细胞种类不同,形成的formazan的量也不一样,所以如果显色不够的话,可以延长培养时间,特别是血液细胞形成的formazan很少,需要较长的显色时间(5-6h)。
      8)用酶标仪测定450nm处的吸光度(OD)。
      9)若暂时不测定OD值,可以在各孔中加入10μl 0.1 M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液,室温避光保存,这样可以保证OD值24h内不发生变化。

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