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elisa试剂盒的产品特点及操作方法
  • 发布日期:2023-07-03      浏览次数:331
    • 产品特点:
      一、高效、灵敏、特异的抗体;
      二、稳定的重复性和可靠性;
      三、吸附性能好,空白值低,孔底透明度高的固相载体;
      四、适用血清、血浆、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等等多种标本类型;
      五、节省实验经费。
      elisa试剂盒回收率是反应待测物在样品分析过程中的损失的程度,损失越少,回收率越高,如果作标液1PPM,就是1毫克/升,而作出标准数据为0.99毫克/升,就是说你的回收率是99%,这个与真实成分有密切的关系,说明方法的准确度。比如水中总无机氯含量测定,样品水中含有无机氯20mg/L,取100mL被测水样品,加入0.1mL浓度为10mg/mL的含无机氯标准样品,测定时忽略体积变化,如果测定出样品中无机氯为29.8mg/L,则认为回收率为99%。

      操作方法
      双抗体夹心法
      1.包被:用0.05MPH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1~10μg/ml。在每个聚苯乙/烯板的反应孔中加0.1ml,4℃ 过夜。次日,弃去孔内溶液,用洗涤缓冲液洗3次,每次3分钟。(简称洗涤,下同)。
      2. 加样:加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃ 孵育1小时。然后洗涤。(同时做空白孔,阴性对照孔及阳性对照孔)。
      3. 加酶标抗体:于各反应孔中,加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃ 孵育0.5~1小时,洗涤。
      4. 加底物液显色:于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分钟。
      5. 终止反应:于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。
      6. 结果判定:可于白色背景上,直接用肉眼观察结果:反应孔内颜色越深,阳性程度越强,阴性反应为无色或极浅,依据所呈颜色的深浅,以“+"、“-"号表示。也可测OD值:在ELISA检测仪上,于450nm(若以ABTS显色,则410nm)处,以空白对照孔调零后测各孔OD值,若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍,即为阳性。

      间接法
      1.用包被缓冲液将已知抗原稀释至1~10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃过夜;
      2.次日洗涤3次;
      3.加一定稀释的待检样品(未知抗体)0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤;
      4.(同时做空白、阴性及阳性孔对照)于反应孔中,加入新鲜稀释的酶标第二抗体(抗抗体)0.1ml;
      5.37℃孵育35-60分钟,洗涤;
      6.’最后一遍用DDW洗涤。
      其余步骤同“双抗体夹心法"的4、5、6。

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