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使用细胞爬片时的准备及操作方法有哪些?
  • 发布日期:2023-04-25      浏览次数:1028
    • 浸泡并过夜,第二天先用自来水冲洗20遍,再置于无水酒清中浸泡6小时,再用三蒸水冲洗3遍(个人认为主要目的是将酸冲洗干净就可以了,如果不干净的话,细胞帖壁不好),放在饭盒或者玻璃培养皿中烘干后进行高压消毒。高压后取出放入烤箱中烤干,备用。烤干后可放入超净台中。

      4.多聚赖氨酸的使用:

      很多人都将玻片用此处理,以使细胞与玻片结合更牢。但我在做爬片时从来没用过多聚赖氨酸,细胞贴壁仍然很好,且在做后续的免疫细胞化学染色、TUNEL等凋亡检测、免疫荧光等也从未脱过片。

       

      细胞爬片的操作

      1.胰酶消化细胞后计数重悬细胞于培养基中。

      2.加细胞前,根据玻片的大小,先在每个孔里准备放爬片的位置滴少量培养基,使玻片与培养皿靠培养基的张力粘合到一起,然后放玻片,防止加细胞悬液时玻片漂起,造成双层细胞贴片。(整个过程注意无菌操作)

      3.根据自己的需要选择合适的细胞密度接入培养板内即可。

      4.待细胞贴壁后,可去上清加含药培养基。

      5.按照实验设计,作用一定时间后取玻片。取玻片时由于玻片与培养皿底结合较紧,张力较大,一般将注射器针头针尖向背面弄个小钩,这样将爬片轻轻勾起,用小镊子取出就可以了。如果要做诸如24h,48h,72h等这样时间点的实验的话,将所需数量的爬片取出时应用酒精灯火焰烧一下针头和镊子。末取出的可接着继续培养。

       

      细胞爬片的固定

      另外在保存细胞爬片的时候,一般用培养皿或板,先在皿底放一层面巾纸,然后再放爬片,这样方便做实验时取片。

      细胞爬片取出后,一般用PBS洗2遍,然后再做固定。当然,有例外,比如做凋亡的TUNEL染色时就避免洗,因为凋亡的细胞在洗的过程中有可能会脱落。

      然后盖上盖子,并在盖子上做标记,为避免混淆,可用透明胶带将盖子和皿连在一起。一般-20℃保存2-3个月的片子做免疫组化是没有问题的。

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