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胰蛋白酶-EDTA消化液(0.25%)的使用说明
  • 发布日期:2023-04-24      浏览次数:989
    • 产品说明:

      在组织细胞的体外培养和原代细胞培养中的组织细胞分散(将组织块制备成单个细胞悬液)以及传代细胞培养中,贴壁生长细胞的消化分散均要使用组织细胞消化液。常用的消化液为胰蛋白酶,EDTA等,其功能主要是使细胞间的蛋白质(如细胞外基质)水解,使组织或贴壁细胞分散成单个细胞,制成细胞悬液用于进一步的实验。

      胰蛋白酶-EDTA消化液(Trypsin-EDTASolution)含0.25%胰酶和0.02%EDTA(0.53mM),溶于无钙镁平衡盐溶液中,经过滤除菌,可以直接用于培养细胞和组织的消化。胰蛋白酶-EDTA消化液具有方便快速、稳定安全、细胞状态好等特点。通常室温消化2分钟左右就可以消化下大多数贴壁细胞。胰蛋白酶-EDTA消化液有含酚红和不含酚红2类产品,酚红具有pH 指示作用。


      使用方法:

      1. 贴壁细胞的消化:

      a) 吸去培养液,用无菌的PBS、Hanks 液或无血清培养液洗涤细胞一次,以去除残余的血清。b) 加入少量胰蛋白酶-EDTA消化液,盖过细胞即可,室温放置1-2分钟。不同的细胞消化时间有所不同,对于贴壁牢固的细胞可适当延长消化时间。

      c) 显微镜下观察,细胞明显收缩,并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的规格100ml 100ml 备注不含酚红含酚红

      变化;或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来。此时吸除消化液。加入含血清的细胞培养液,吹打下细胞,即可直接用于后续实验。

      d) 如果发现消化不足,可加入胰蛋白酶-EDTA消化液重新消化。

      e) 如果发现细胞消化时间过长,未及吹打细胞,细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落,直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000-2000g离心1分钟,沉淀细胞,尽量去除胰酶细胞消化液后,加入含血清的培养液重新悬浮细胞,即可用于后续实验。

      2. 组织的消化:

      不同的组织需要消化的时间相差很大,通常以消化后可以充分打散组织为宜。


      注意事项:

      1.由于组织或细胞性质不同,实验人员应依据具体情况,确定最佳消化时间;消化细胞时间不宜过长,否则会影响细胞贴壁和生长状况;

      2.本产品不含抑菌剂,在使用过程中要特别注意无菌操作,避免消化液被微生物污染;

      3.不宜4℃长期保存,切忌反复冻融,小量使用时建议分装冻存;

      4.为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。


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