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蛋白Marker使用指南
  • 发布日期:2022-12-14      浏览次数:1068
    • western Blot过程中,蛋白Marker虽然是其中小小的一环,但是这个小细节对实验结果的影响不可忽视。Marker在蛋白电泳中的作用主要是用来指示蛋白条带所对应的分子量大小,只有标准量精确无误,实验结果才有说服力。此外, Marker还能显示转膜是否成功以及蛋白在凝胶上的电泳程度的作用。因此选择正确的蛋白Marker也是western blot实验成功的必要条件之一。总体来说,蛋白分子量标准可以分成未染蛋白分子量标准、预染蛋白分子量标准二个级别。

       

      未染色的蛋白分子量标准

       

      未染色的蛋白分子量标准是zuijiandan,也是最准确的一种。由于没有附带染料分子或者是标记分子,所示大小正好是蛋白原本的大小,是精确判断蛋白大小必须的。未预染的Marker可分为宽分子量蛋白标准、高分子量蛋白标准以及低分子量蛋白标准。

       

      ① 宽分子量蛋白标准

       

      如果从实验的整体考虑的,就选择范围尽量宽条带分布比较均匀的,这样容易判断你的蛋白在哪个区间。不过蛋白marker条带越多,每次上样量也就越费。如果买的是大包装,建议分装成小体积使用,多次反复冻融不利于蛋白marker的保存和继续使用。

       

      ② 高分子量蛋白标准

       

      通常在检测大分子量蛋白经常使用到高分子量蛋白标准。

       

      ③ 低分子量蛋白标准

       

      在一般的蛋白电泳当中,更常用的是低蛋白标准分子量,除了有指示蛋白大小的作用以外,有时还可以用作粗略的定量。特别小的蛋白Marker条带如果要显色好,一定要保证足够的上样量。

       

      预染蛋白Marker

       

      预染蛋白Marker是一些纯化好的蛋白混合物,通过与染料共价耦联,在电泳过程中或者转膜时可以直接观察到。预染蛋白分子量的出现方便了实验,可以帮助我们在电泳时、电泳后以及转膜后监测电泳情况和估计迁移率。由于预染蛋白Marker是与染料共价耦联,所以在不同的缓冲条件下电泳时迁移特性可能会发生某些变化,可能导致一些偏差,所以不太适合精确定位蛋白。不过多数情况下Marker的条带未必能和我们的目标蛋白wanquan一样,我们得到的也不过是一种相对Marker指示的参考大小,最后都需要Western来定性,所以如果不是要区分大小相近的条带,预染Marker还是很好用的,而且也可以和未染色的蛋白标准一起使用。


      预染蛋白标准可以分为两种:单色预染和多色预染,如果用多色的彩虹Marker跑出来五颜六色的蛋白条带,在比较沉闷的电泳实验中也能增添一抹亮色,此时在枯燥的实验过程中心情也会愉快一些吧!


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