PAN南美胎牛血清

PAN南美胎牛血清

PAN南美胎牛血清

PAN胎牛血清使用方法

在细胞培养过程中，经常加入5%-20%的胎牛血清，常使用的PAN胎牛血清浓度是10%。高浓度的血清可能改变细胞的基因表达谱，影响后续实验的结果，我们在实验中使用10%的PAN澳洲胎 牛血清培养293T细胞，效果非常好。但是有些细胞也会使用5%的PAN胎牛血清南美或者20%的PAN胎牛血清，要根据具体 细胞选择合适的PAN胎牛血清浓度。

PAN胎牛血清保存方法

1、需要长期保存的PAN牛血清必须储存于-20℃ - 70℃ 低温冰箱中。4℃冰箱中保存时间切勿超过1个月。切勿将血清在 37℃放置太久,否则血清会变得浑浊,同时血 清中的有效成分会被破坏，而影响血清质量。如果一次无法用完一瓶,可 将40～45ml分装于无菌50ml离心管中。由于血清结冰时体积会增加约10%,因此,血清在冻入低温冰箱前，必须预留 一 定体积空间,否则易发生污染或玻璃瓶冻裂。

2、一般厂商提供的血清为无菌,无需再过滤除菌。如发现血清有悬浮物,则可将血清加入培养液内一起过滤,切勿直接 过滤血清。

3、瓶装血清解冻需采用逐步解冻法:-20℃ 至 -70℃ 低温冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天.然后移入室温,待全 部溶解后再分装,一般以50ml无菌离心管可分装40～45ml。在溶解过程 中须规则摇晃均匀(小心勿造成气泡),使温度 与成分均一,减少沈淀的发生。.切勿直接将血清从-20℃进入37℃解冻,这样因温度改变太大,容易造成蛋白质凝集而 出现沉淀。

4、热灭活是指56℃, 30分钟加热已*解冻的血清.加热过程中须规则摇晃均匀.此热处理的目的是使血清中的补体 成分灭活.除非必须,一般不建议作此热处理,因为热处理会造成血清沉 淀物显著增多,而且还会影响血清的质量.补体 参与反应有:细胞毒作用, 平滑肌细胞收缩, 肥大细胞和血小板释放组胺, 增强吞噬作用, 促进淋巴细胞和巨噬细胞 发生化学趋化和活化。

5、血清中的沉淀物 絮状物:主要是血清中的脂蛋白变性及解冻后血清中纤维蛋白造成,这些絮状物不会影响血清本身 的质量.可用离心3000rpm,5分钟去除,也可不用处理。 显微镜下 "小黑点":经过热处理过的血清,沉淀物 的形成会显著增多。有些沉淀物在显微镜下观察象"小黑点",常误认为血清受污染。一般情况下,此小黑 点不会影响细胞生 长,但如果怀疑血清质量,则应立即停止使用,更换另一批号的血清。

1、保存血清的方法：

建议血清应保存在-5℃ 至 -2O ℃ 。然而，若存放于 4 ℃ 时，请勿超过一个月。若您一次无法用完一瓶 ，建议您无菌分装血清至恰当的灭菌容器内，再放回冷冻。

2、如何解冻血清才不会使产品质量受损：

建议您将血清从冷冻箱取出后，先置于2～8℃ 冰箱使之溶解，然后在室温下使之全溶。但必须注意的是， 溶解过程中必须规则地摇晃均匀。

3、PAN牛血清解冻后发现有絮状沉淀物出现，该如何处理：

血清中沉淀物的出现有许多种原因，但普的原因是由于血清中脂蛋白的变性所造成，而血纤维蛋白(形成 凝血的蛋白之一)在血渭解冻后，也会存在于血清中，亦是造成沉淀物 的主要原因之一。但这些絮状沉淀物，并不影 响血清本身的质量。

若您欲去除这些絮状沉淀物，可以将血清分装至无菌离心管内，以400g稍微离心，上清液即可接着加入培 养基内一起过滤。我们不建议您以过滤的方法去除这些絮状沉淀物，因 为它可能会阻塞您的过滤膜。

4、何谓热灭活：

一般是以 56℃ ， 30 分钟来处理已解冻的血清，因为此加热步骤，可以使补体去活化，而补体所参与的 反应有 : 溶细胞活性，平滑肌的收缩，肥大细胞和血小板组胺的释放 ，增强吞噬作用，淋巴细胞、巨噬细胞的趋化 和激活。

5、关于胎牛血清的灭活：

有必要做热灭活吗？

实验显示，经过正确处理的热灭活血清，对大多数的细胞而言是不需要的。经此处理过的血清对细胞的生 长只有微小的促进，或*没有任何作用，甚至通常因为高温处理影响 了血清的质量，而造成细胞生长速率的降低。 而经过热处理的血清，沉淀物的形成会显著的增多，这些沉淀物在倒立显微镜下观察，像是“小黑点" ，常常会让研究者误以 为是血清遭受污染，而把血清放在 37℃ 环境中，又会使此沉淀物更增多，使研究者误认为是 微生物的分裂扩增。

因此我们建议您，若非必须，您可以不需要做热处理这一步。如此一来，不但节省您宝贵的时间，更确保 您血清的质量！

6、PAN胎牛血清相关知识：

如何避免沉淀物的产生？

我们建议您在使用血清的时候，注意下列的操作 :

(1)解冻血清时，请按照所建议的逐步解冻法(-2O℃至4℃至室温)，若血清解冻时改变的温度太大(如-20℃ 至37℃)，实验显示非常容易产生沉淀物。

(2)解冻血清时，请随时将之摇晃均匀，使温度及成分均一，减少沉淀的发生。

(3)请勿将血清置于37℃太久。若在37℃放置太久，血清会变得混浊，同时血清中许多较不稳定的成分也会 因此受到损害，而影响血清的质量。

(4)血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以无须做此步骤。

(5)若必须做血清的热灭活，请遵守56℃，30 分钟的原则，并且随时摇晃均匀。温度过高，时间过久或摇 晃不均匀，都会造成沉淀物的增多。