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对于胰酶HyClone的使用,使用者需要注意些什么?
  • 发布日期:2020-03-20      浏览次数:1001
    •    对于胰酶HyClone的使用,使用者需要注意些什么?
        胰酶HyClone是一种自猪胰中提取的多种酶的混合物,主要为胰蛋白酶(将蛋白质消化成蛋白胨)、胰淀粉酶(将淀粉消化成糖)与胰脂肪酶(将脂肪消化成甘油和脂肪酸)。其通过在特定位置上降解蛋白,使细胞间结合处蛋白降解,这时细胞由于自身内部细胞骨架的张力作用下成为球形,从而使细胞分开。
        不同的组织或者细胞对胰酶的作用反应不一样。胰酶分散细胞的活性还与其浓度、温度和作用时间有关,在pH为8.0、温度为37℃时,胰酶溶液的作用能力zui强。使用胰酶时,应把握好浓度、温度和时间,以免消化过度造成细胞损伤。因Ca2+、Mg2+和血清、蛋白质克降低胰酶的活性,所以配制胰酶溶液时应选用不含Ca2+、Mg2+的BSS,如:D-Hanks液。终止消化时,可用含有血清培养液或者胰酶抑制剂终止胰酶对细胞的作用。
        胰酶HyClone使用注意
        1.在使用胰酶细胞消化液的过程中要特别注意避免消化液被细菌、支原体污染。
        2.胰酶细胞消化液消化细胞时间不宜过长,过长会损伤细胞,导致细胞铺板后生长状况较差。
        贴壁细胞的消化
        1.吸去培养液,用无菌的PBS、Hanks液或无血清培养液洗涤细胞一次,以去除残余的死细胞/血清。
        2.加入少量胰酶细胞消化液,略盖过细胞即可,根据胰酶效率差异可以增加惑减少胰酶用量,室温放置2-5分钟(不同的细胞消化时间有所不同)。
        3.显微镜下观察,细胞明显皱缩成圆形,并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变化呈白茫状;或者在瓶壁上有部分成点状区域细胞脱落;或者用手拍打克氏瓶正好能够使细胞脱落;或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来。
        4.此时加入含血清的*细胞培养液停止消化,吹打下细胞,即可直接用于后续实验;如果发现消化不足,则加入胰酶细胞消化液重新消化。钙离子、镁离子和血清蛋白的存在会降低胰酶活力。因此,胰酶HyClone溶液常用无Ca2+、Mg2+的D-Hanks’平衡盐溶液配制成0.25%溶液。消化细胞时,加入一些血清或含血清的培养液,或胰蛋白酶抑制剂能终止胰蛋白酶对细胞的消化作用。
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