一:取材
撕取洋葱鳞茎内表皮2~3mm2置于载玻片上,用吸管加6mmoI的PBS缓冲液两滴,使材料充分浸入到液体中,处理约5分钟。(撕取的材料大小适中,且为内表皮)
二:去垢处理
用吸水纸吸净浸泡材料的PBS缓冲液,加2~3滴37°C预温的去垢剂1%TritonX-100,使液体充分浸泡材料,并立即放入37C水浴锅中处理15分钟。(吸水纸不要直接在材料上面吸,以免带丢材料,去垢处理过程中不要让材料干燥)
三:冲洗
吸去 1%Triton,用6mmol的PBS缓冲液轻轻冲洗,反复两至三次。
四:固定
用吸水纸吸尽PBS缓冲液,加2滴3%戊二醛固定约20分钟。
五:冲洗
吸去3%戊二醛固定液,用6mmol的PBS缓冲液轻轻冲洗,反复两至三次。
六:染色
吸去PBS缓冲液,滴几滴0.2%考马斯亮蓝R250染料,染色约10分钟。
七:制片
加盖盖玻片,用吸水纸吸去多余染料。(加盖玻片时倾斜放置,避免气泡产生;吸去多余染料时仅吸去盖玻片四周溢出的染料,不要太干,以免产生气泡)
八:观察
观察将制好的玻片置于低倍镜下,可见到规则排列的多边形洋葱表皮细胞轮廓,在细胞质中可见到被染成蓝色的粗细不等的分枝状或点状结构,这就是细胞骨架。然后转高倍镜继续观察,调节细准焦螺旋可见到细胞骨架的立体结构。