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冰冻切片免疫荧光实验
  • 发布日期:2024-05-28      浏览次数:194
    • 1、冰冻切片固定

      冰冻切片37℃烘烤10至20分钟,控干水分,置于4%多聚甲醛固定30min。于PBS缓冲液中晃动洗涤3次,每次5分钟。

      2、抗原修复

      将切片浸没在升满EDTA抗原修复缓冲液(PH8.0)的修复盆中,置于微波炉内进行抗原修复,修复条件:中火8min至沸——停火8min保温——中低火7min(整个过程需防止修复液过度蒸发,切勿干片。

      自然冷却后,将切片置于PBS缓冲液中。然后在摇床上,晃动洗涤3次,每次5min。

      3、画圈血清封闭

      切片稍甩干后,用组化笔在组织周围画圈,滴加组织自发荧光淬灭剂A液,室温孵育30min,纯水洗5分钟,接着滴加BSA牛血清白蛋白,封闭30min。

      4、加一抗

      轻轻甩掉封闭液,在切片上滴加按比例配好的一抗后,切片平放于湿盒内4℃孵育过夜,这里推荐使用生科云选一抗实验效果更佳。

      5、加二抗

      切片浸没在PBS缓冲液中,然后在生科云选摇床上,晃动洗涤3次,每次5min。切片稍甩干后,滴加生科云选荧光二抗,覆盖组织,避光室温孵育50min。这里推荐使用生科云选二抗实验效果更佳。

      6、DAPI复染细胞核

      切片浸没在生科云选PBS缓冲液中,晃动洗涤3次,每次5min。甩干后,在圈内滴加生科云选即用型DAPI染液,避光室温孵育10min。

      7、淬光组织自发荧光

      切片置于生科云选PBS缓冲液中,晃动洗涤3次,每次5min。在圈内滴加生科云选组织自发荧光淬灭剂B液,避光室温孵育5min,水洗10min。

      8、封片

      切片稍甩干后用生科云选抗荧光淬灭封片剂封片,推荐使用生科云选配套试剂、耗材、仪器,实验效果更佳!

      冰冻切片免疫荧光结果判读:

      DAPI染出来的细胞核在紫外的激发下为蓝色,阳性表达为相应荧光素标记的红光或绿光等。

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