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细胞传代实验
  • 发布日期:2024-01-10      浏览次数:336
    • 所需材料:装有75%医用消毒酒精的酒精喷壶、PBS缓冲液、胰酶、含血清培养基、巴氏吸管、移液器、离心管、废液缸,以及拥有基础设施的细胞间。

      操作步骤:
      1.紫外照射灭菌后,我们应该穿好灭菌服,戴好灭菌手套和口罩。
      2.从培养箱取出细胞培养瓶(一般选择处于对数期的细胞),用酒精喷壶在培养瓶表面喷洒75%酒精消毒,转移培养瓶到超净台。
      3.打开盖子,轻轻吸出旧的培养液,用巴氏吸管加入适量PBS缓冲液洗涤1-2次(注意从侧壁加入,以免冲掉细胞),弃去PBS缓冲液。
      4.可用移液器加入1-2ml胰酶(具体量根据实验需要确定,此处仅为参考用量),“十字"晃动,使胰酶充分接触细胞。
      5.将加入胰酶的细胞培养瓶转移到倒置显微镜载物台,镜下观察细胞消化情况,当细胞变圆且大量脱落时,准备终止消化,用75%的酒精喷洒培养瓶表面,转移到超净台。
      6.用移液器(或巴氏吸管)加入等量含血清培养基,终止消化。移液器(或巴氏吸管)充分吹打(动作也不要太猛,毕竟细胞也是蛮脆弱的),使细胞能够脱落。
      7.将培养瓶中混合液体转移至离心管中(离心管规格根据实验需要确定),配平,离心5分钟左右(离心机转速根据细胞种类而定,常见的有1000rpm/min)。
      8.离心好后,用酒精喷壶喷洒离心管表面,转移进超净台,打开盖子,将上清液倒入废液缸。
      9.加入适量体积含血清培养基,用移液器或巴氏吸管轻轻吹打,制成细胞悬液。
      10.将细胞悬液分装进2个(或多个)洁净灭菌培养瓶,加入适量培养基,盖好盖子将分装好的培养瓶置于倒置显微镜载物台,观察细胞情况,细胞应保证一定数量,数量太少会影响生长情况。
      11.在培养瓶上做标记,注明传代时间,细胞种类,操作人员等信息。在放入培养箱之前应再次用酒精喷一喷培养瓶表面,然后应记得整理操作台,用75%酒精擦拭超净台台面,清理废液和垃圾。


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