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胰蛋白酶在细胞培养中发挥的作用及操作步骤
  • 发布日期:2023-08-24      浏览次数:632
    • 胰蛋白酶是细胞培养实验中常见的一种试剂,他在细胞培养实验中怎样才能发挥该有的作用呢?又该如何进行实验呢?让我们一起来看看!

      作用:
      1.胰蛋白酶是一种消化酶,可分解许多脊椎动物消化系统中的蛋白质,它存在于胰液中。
      2.质膜上的蛋白质负责多种功能,这些功能对于维持细胞的正常生理活动至关重要。
      3.一些质膜蛋白(如钙粘蛋白家族)是粘附蛋白,可作为锚,将细胞骨架蛋白连接到细胞外基质。这有助于细胞粘附和细胞迁移。
      4.在细胞培养物中,可以将胰蛋白酶添加到培养基中,通过消化粘附蛋白从培养皿表面释放贴壁细胞。
      5.胰蛋白酶还通过消化粘附蛋白从聚集体中释放细胞。
      6.EDTA也与胰蛋白酶一起添加到细胞培养物中,以螯合培养基中的二价离子。钙和镁离子可能抑制胰蛋白酶的作用。
      7.最终,胰蛋白酶有助于从细胞培养物中获得单个细胞,促进细胞的下游处理。

      操作步骤:

      1.吸取培养基,用无菌的PBS、Hanks液或无血清培养液洗涤细胞一次,以除去残余的血清。

      2.加入适量的胰蛋白酶消化液,略盖过细胞即可。根据细胞的特性可以增加或减少胰酶用量,室温放置30秒至2分钟。

      3.显微镜下观察,细胞明显收缩,并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变化呈白茫状;或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来。

      4.此时吸除胰酶细胞消化液。加入含血清的细胞培养液,吹打下细胞,即可直接用于 后续实验。如果发现消化不足,则加入胰酶细胞消化液重新消化。

      注意事项:

      1.-20℃保存,冰袋运输,至少1年有效。

      2.应根据不同组织和细胞的性质确定最佳消化时间和胰蛋白酶的用量,消化时间不宜过长,以免影响细胞的活力。

      3.解冻后宜分装使用,避免反复冻融。

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