冰冻切片是一种在低温条件下使组织快速冷却到一定硬度,然后进行切片的方法。因其制作过程较石蜡切片快捷、简便,而多应用于手术中的快速病理诊断。
制备步骤:
将组织在恒温冷冻机里面切片。冷冻腔内的温度一般设置为-18℃至-25℃,根据不同组织调节不同腔温,平时应将冷冻头放置在冷冻台上。冷冻切片机应长期处在冷冻恒温状态。
1、当冰冻组织提取好之后,在冷冻头上放少量的OCT或羧田基纤维素(可用普通胶水代替),放上组织,速冻。
2、待组织冻结后,将冷冻头装刀切片机上。
3、粗切,修出切面细切几张,用毛笔刷去刀上组织片。
4、放下抗卷板,开始切片,切片速度一般为5-6微米,切出的片子用载玻片贴附后立即放入甲醇冰醋酸液(97ml甲醇+3ml冰醋酸)中固定,固定时间为10-20秒。
作用:
OCT冰冻切片包埋剂是由聚乙二醇和金属硬脂酸盐等化学品混合而成的。其中,聚乙二醇是一种聚合物,主要作用是增加包埋剂的黏度,以便于固定组织样本;金属硬脂酸盐则可以帮助固定细胞膜和细胞外基质,防止组织样本在切片过程中失去原有的形态和结构。