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PCR实验原理
  • 发布日期:2023-07-14      浏览次数:706
    • 原理:

      PCR利用DNA聚合酶的催化作用,在高温下依次完成DNA的变性、引物结合和DNA合成等反应,从而使DNA序列得到扩增。PCR的核心是引物,其能够与目标DNA序列的特定区域互补配对,使得DNA聚合酶能够选择性地合成引物两侧的DNA分子,从而扩增出目标DNA序列。

       

      操作过程:

      1. DNA模板的制备:将目标DNA提取出来,使其成为PCR反应的模板。

      2. 引物的设计:根据目标DNA的序列设计引物,以便在PCR反应中能够引导DNA扩增。

      3. PCR管中的混合溶液制备:将模板DNA、引物和PCR反应所需的其他试剂加入混合溶液管中,包括四种dNTP(脱氧核苷酸三磷酸)、

      4. PCR反应条件的设置:旋转电风扇调节样品表面温度,通透底膜PC管盖与PC反式培养皿卡合,自动调节样品超高速温升和降温速率,确保PCR反应条件的恒定性。

      5. PCR反应的进行:将PCR反应管放入PCR仪中,反应程序根据需要进行多次循环,在每一个循环中,反应管中的温度会在一定的温度区间中不断变化,使引物与目标DNA互补结合,DNA链变性,然后DNA聚合酶开始合成新DNA链来扩增目标序列,完成DNA扩增和PCR反应。

      6. PCR反应产物的检测和分离:反应结束后,可以通过凝胶电泳等技术检测PCR反应产物,分离目标DNA扩增产物,进行后续的研究和分析。

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