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TRIZOL的原理和作用
  • 发布日期:2023-02-28      浏览次数:1365
    • 基本原理: TRIZOL是一种新型总RNA抽提试剂,采用变性剂即内含异硫氰酸胍、酚和β-疏基乙醇等变性物质,能迅速破碎细胞,抑制细胞释放出的核酸酶。

      各组分作用: 苯/酚: 主要作用是裂解细胞,使细胞中的蛋白和核酸物质解聚得到释放。苯/酚虽可有效地变性蛋白质,但不能抑制RNA酶活性。
      异硫氰酸胍: 属于解偶剂,是一类强力的蛋白质变性剂,可溶解蛋白质,并使蛋白质二级结构消失,细胞结构降解,核蛋白迅速与核酸分离,保护RNA完整性。
      β-疏基乙醇: β-疏基乙醇主要破坏RNase蛋白质中的二硫键。
      8-羟基喹/啉: 0.1%的8-羟基喹/啉可以抑制RNase,与氯/仿联合使用可以增强抑制作用。
      柠檬酸钠、EDTA: 可以络合金属离子,抑制金属离子对核酸酶的辅助作用,且具有良好的缓冲能力。
      甘油: 促进苯/酚在溶液中的溶解,保证TRIZOL在4℃中保持单向存在。 PH: 低PH值的酚将使RNA进入水相,这样使其与仍留在有机相中的蛋白质和DNA分离。
      氯/仿: 其主要用处是用来分相,实际上是加速有机相和水相的分层,也有变性蛋白质的作用。
      异丙/醇: 沉淀核酸。增加RNA局部密度,使RNA从可溶状态变为固态不可溶状态。通过-OH的疏水作用使得RNA链中的亲水基团受到保护,等同于沉淀。
      75%乙/醇: 无脱水作用,挥发性好从而减少水化层的形成,避免对下游实验造成影响。通过有机溶剂相似相溶的原理达到洗涤RNA的目的。
      RNA酶抑制剂: 异硫氰酸胍和β-巯基乙醇,再加上冰水浴,可以显著降低RNA的降解速率。

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