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流式细胞DNA分析临床意义
  • 发布日期:2022-11-23      浏览次数:648
    • 流式细胞仪的临床应用:

      1. 流式细胞术在肿瘤学中的应用:流式细胞术可以检测肿瘤细胞增殖周期、检测肿瘤细胞表面标记、癌基因表达产物、进行多药耐药性分析、检测凋亡;

      2. 流式细胞术在血液学中的应用:检测白血病和淋巴瘤细胞、活化血小板、造血干细胞(CD34+)计数、白血病与淋巴瘤的免疫分型、网织红细胞计数、细胞移植的交叉配型和免疫状态监测;

      3. 流式细胞术在免疫学中的应用:可以进行淋巴细胞及其亚群分析、淋巴细胞免疫分型、检测细胞因子。异常结果:有资料表示对71例胸腔积液做流式细胞DNA分析,结果显示,对恶性胸腔积液诊断的敏感性为52%,特异性达100%。若与常规检查联合应用,则可使诊断的敏感性达到94%。癌性胸水细胞的DNA分析可见异倍体和S期、G2/M期细胞比例增高。

       

      流式细胞DNA分析检查过程:

      流式细胞仪并非是自动化的仪器,准确的实验结果还需要准确的人工技术配合,所以标本制备需要规范,仪器本身亦需要质量控制。

      (一)流式细胞术免疫学检测的影响因素和质量控制

      流式细胞术在免疫学中有着广泛的应用,其免疫荧光染色的标本制备非常重要,常常由于标本制备过程中出现人为非特异性荧光干扰(尤其在间接免疫荧光染色中)或细胞浓度低等影响检测结果。解决这些影响因素的方法如下:

      (1)确保标本上机检测前的浓度为1X106细胞/ml,细胞浓度过低直接影响检测结果。

      (2)使用蛋白封闭剂,封闭非特异结合位点,尤其在间接免疫荧光标记时需要。常用的蛋白封闭剂为0.5%牛血清白蛋白和1%胎牛血清。

      (3)荧光抗体染色后充分洗涤,注意混匀和离心速度,减少重叠细胞和细胞碎片。

      (4)设置对照样品,采用与抗体来源同型匹配的无关对照和荧光抗体的本底对照。

      (5)判定结果时,应注意减去本底荧光,为使免疫荧光的定量分析更精确,应用计算机程序软件,用拟合曲线方法从实验组的曲线峰值中减去对照组的曲线峰值,可以得到更准确的免疫荧光定量结果。

      (6)注意染色后避光,保证细胞免疫荧光的稳定。

      (二)DNA倍体分析的质量控制仍没有统一的标准,各文献报道的实验结果差异较大,1993年10月美国癌症研究组织制定了FCMDNA测定的统一标准,我们根据这些标准并结合国内有经验的专家多年的实践,对FCM的DNA分析技术的质控和注意事项进行说明。

      (1)手术切除的新鲜标本或活检针吸标本取材时,要避免出血坏死组织。

      (2)标本采集后要及时固定或深低温保存,以免组织发生自溶,DNA降解,而造成测试结果的误差。

      (3)固定剂要采用对组织细胞穿透性强的浓度,70%的乙醇固定效果较好。

      (4)单细胞悬液制备过程中,注意将待测细胞成分分离出来,减少其他成分的干扰,并注意不要损伤该群细胞。

      (5)细胞样品的采集要保证足够的细胞浓度,即1X106细胞/ml,杂质、碎片、团块和重叠细胞应8%,与肿瘤细胞的异质性有关。另外,DNA倍体分析时,同源组织的不同个体会出现10%的漂移。

      (6)DNA倍体标准的质量控制,采用相同个体同源正常组织、同样固定方法、相同的样品处理方法、相同的染色方法、同步染色、同样的仪器检测条件、正常的二倍体组织作为内标准。

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