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PCR反应体系,有哪些?
  • 发布日期:2021-08-04      浏览次数:7078
    • PCR板是一种在聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction ,PCR)中主要作为参与扩增反应的引物、Taq DNA聚合酶、dNTP、模板核酸、Mg、缓冲液等的承载物。

      PCR反应体系:

      1. 缓冲液
      标准的缓冲液含 1pmol/ml Tris ·HCl,其 pH 为 8.3-9.0(室温),而在延伸温度(72 ℃)下,pH 值接近 7.2 。缓冲液中含有一种二价阳离子,用于激活 DNA 聚合酶的活性中心,一般使用 Mg2+
      2.dNTP
      脱氧核糖核苷三磷酸的缩写,是包括 dATP, dGTP, dTTP, dCTP 等在内的统称,即合成新的 DNA 链的材料。4 种 dNTP 的浓度相等,总浓度一般为 200pmol/ml (即饱和浓度)。dNTP 可与 Mg2+ 结合,使游离的 Mg2+ 浓度下降,影响 DNA 聚合酶的活性。
      3. 引物
      引物是一段短的单链 DNA 片段,可结合在核酸链上与之互补的区域,其功能是作为核苷酸聚合作用的起始点,DNA 聚合酶可由其 3′端开始合成新的核酸链。引物长度一般以 18~30bp 为宜,过短则降低特异性,过长则会引起引物间的退火而影响有效扩增,同时也增加引物合成的成本。引物的碱基顺序不能与非扩增区有同源性。
      4. 模板
      模板是一段单链或者双链 DNA,提供用于进行 PCR 扩增的原始信息。对模板的纯度要求低,但不能混有蛋白酶、核酸酶、DNA 聚合酶抑制剂、DNA 结合蛋白等。模板 DNA 应该尽量保持低温保存。
      5.Taq DNA 聚合酶
      Taq DNA 聚合酶以 DNA 为复制模板,从将 DNA 由 5' 端点开始复制到 3' 端的酶。DNA 聚合酶的主要活性是催化 DNA 的合成(在具备模板、引物、dNTP 等的情况下)及其相辅的活性。必须一直保存于-20℃,内含甘油保存。最适反应温度 72 ℃,即延伸温度。通常在配制 PCR 体系的最后加入。


      材质:
      其本身材质在当今主要以聚丙烯(PP)为主,能更好适应PCR反应过程中反复高低温设定,并且能够实现高温高压灭菌操作。为配合排枪、PCR仪等实现高通量操作,较常使用的为96孔或384孔的PCR板。板型符合SBS国际标准,且为适应不同厂家的PCR仪,根据裙边设计又可分为无裙边、半裙边、升裙边和全裙边四种设计模式。

      常见颜色:
      有透明和白色,其中白色更适合用于新型的实时荧光定量PCR。

      用途:
      广泛应用于遗传、生化、免疫、医药等领域,不仅应用于基因分离、克隆和核酸序列分析等基础研究,还可用于疾病的诊断或任何有DNA,RNA的地方,属于实验室一次性易耗品。

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